2008年, 第15卷, 第3期　刊出日期：2008-06-25

  

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临床研究
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  结肠癌细胞表达的细胞外基质Reelin在淋巴结转移中的作用

  董胜翔，黄钢，孙晓光，袁济民，严惟力，邹晓文，朱长清

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 129-131.

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  探讨一种由结肠癌细胞表达的细胞外基质Reelin在淋巴结转移中的作用。构建了99例结肠癌及其癌旁组织的组织芯片进行免疫组织化学染色，探测其表达强度并结合临床资料进行分析。结果显示，Duke’s A，B，C，D分期与结肠癌细胞Reelin表达强度无关，结肠癌细胞Reelin表达强度与其淋巴结转移潜能相关，结肠癌细胞Reelin表达强度每增加一个单位，其转移进入淋巴结的能力将增加3.523倍。结肠癌细胞表达Reelin与其淋巴结转移密切相关，Reelin可以作为结肠癌淋巴结转移预测的一个新指标。
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  消化道肿瘤患者血清VEGF及TP检测的临床意义

  王书奎，张振玉，何帮顺，潘玉琴，杜同信，王自正

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 132-135.

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  探讨患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)及胸苷磷酸化酶(TP)检测在消化道肿瘤诊断及预后判断中的临床意义。用双抗体夹心ELISA法检测了89例消化道肿瘤患者血清中的VEGF和TP水平，并与83例消化道良性疾病患者及45名健康对照者进行了比较分析。结果显示，消化道恶性肿瘤患者血清中的VEGF及TP水平显著高于消化道良性疾病患者(P<0.01，P<0.05)及健康对照组(P<0.01，P<0.01);消化道恶性肿瘤患者血清中的VEGF及TP含量与临床分期及病理分级密切相关，均随着临床分期及病理分级的升高而逐渐增加，其含量分别在临床分期IV期和病理分级III级时到达最高(P<0.01，P<0.01)，且消化道肿瘤患者VEGF与TP含量呈显著正相关(r=0.8427， P=0.007)。联合检测血清中的VEGF和TP含量简便快捷，可用于消化道肿瘤的辅助诊断及肿瘤的恶性程度判断及预后观察。
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  高敏CRP、vWF和CD62P联合检测在冠心病患者的应用

  高淑芳，姜维洁，董静懿

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 136-138.

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  探讨超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血管性血友病因子(von Willebrand factor，vWF)、血小板表面P选择素(CD62P)的变化与冠心病患者的关系及其临床价值。对40例冠心病患者(不稳定性心绞痛)及30名正常人采用乳胶增强免疫比浊法测定hs-CRP，ELISA测血浆vWF，流式细胞仪(FCM)测定血小板膜CD62P阳性百分率(%)。结果显示，冠心病组的hs-CRP显著高于对照组(P<0.01)，血浆vWF显著高于对照组(P<0.01)，CD62P阳性率显著高于对照组(P<0.01)。联合检测hs-CRP、vWF和CD62P对冠心病患者的辅助诊断、疗效和预后观察有一定价值。
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  肺癌患者外周血TA活性及CEAmRNA、CK19mRNA的转录情况及其意义

  李晓阳，郭学青，薛承岩

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 139-141.

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  为了了解肺癌患者外周血细胞TA及CEA mRNA和CK19 mRNA的转录情况及其检测的临床意义，选取肺癌患者103例、肺良性病变患者(疾病对照组)67例和健康人(健康对照组) 37名，采集外周血细胞，应用逆转录-套式-聚合酶链反应法(RT-NP-PCR)检测CEA mRNA和CK19 mRNA，端粒末端重复序列扩增-杂交-酶联免疫法检测TA。结果发现，肺癌组三种标志物阳性率均显著高于两个对照组(P<0.01)，且CEA mRNA和TA的阳性率均显著高于CK19 mRNA(P<0.01)。小细胞肺癌CEA mRNA的阳性率显著低于其他类型肺癌(P<0.05)，且显著低于TA(P<0.05)。结果表明检测血液CEA mRNA、CK19 mRNA转录和TA有助于发现肺癌细胞血液转移，其中CEA mRNA和TA的诊断价值高于CK19 mRNA;联合检测CEA mRNA和TA有助于鉴别小细胞肺癌。
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  晚期肺癌患者血CD⁺₄CD⁺₂₅调节T细胞水平的变化

  姜维洁，董静懿

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 142-144.

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  为探讨晚期肺癌患者CD⁺₄CD⁺₂₅调节T细胞水平的变化及其与其它T细胞亚群和NK细胞的相互关系，对86例肺癌组患者和64名对照组测定和比较CD⁺₄CD⁺₂₅调节T细胞、T细胞亚群(CD⁺₃、CD⁺₄、CD⁺₈、CD⁺₈CD⁺₂₈)和NK细胞的水平，探讨其临床意义。CD⁺₄CD⁺₂₅细胞和T细胞亚群均用流式细胞仪检测。结果表明，晚期肺癌患者血CD⁺₄CD⁺₂₅细胞明显高于对照组(18.4%±6.2% vs 7.1%±0.4%，P＜0.01)， CD⁺₄细胞、CD⁺₈CD⁺₂₈细胞和NK细胞明显低于对照组(32.4%±8.7% vs 44.9%±8.4%，P＜0.01;7.4%±3.5% vs 16.5%±2.7%，P＜0.01;10.2%±4.1% vs 18.5%±7.2%，P＜0.01)， CD⁺₈细胞明显高于对照组(36.7%±7.5% vs 31.8%±5.1%，P＜0.01)。CD⁺₄CD⁺₂₅细胞与CD⁺₈CD⁺₂₈细胞、NK细胞呈明显负相关。表明CD⁺₄CD⁺₂₅细胞增多是晚期肺癌患者免疫功能紊乱的一个证据。
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  肺结核患者治疗前后血清GM-CSF和hs-CRP水平检测的临床意义

  李清，廖郎，谢晋，康熙雄

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 145-146.

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  探讨了肺结核患者治疗前后血清粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和hs-CRP水平的变化及其意义。应用放免法和免疫比浊法对40例肺结核患者进行了血清GM-CSF和hs-CRP水平测定，并与35名正常人作对照。在治疗前肺结核患者血清GM-CSF和hs-CRP水平均显著高于正常人组(P＜0.01)，经3个月治疗后血清GM-CSF和hs-CRP水平与正常人比较无显著性差异(P＞0.05)。患者治疗前后的血清GM-CSF和hs-CRP水平具有显著性差异(P＜0.01)。检测肺结核患者血清中GM-CSF和hs-CRP水平的变化与患者的病情和预后密切相关，有重要的临床价值。
基础研究
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  胱硫醚-β-合成酶和胱硫醚-β-裂解酶在颈动脉体中的分布

  王小芳，张镜年，孙碧英，李倩，董莉，金珠，戎伟芳

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 147-149.

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  本研究探讨胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-β-裂解酶(CSE)在颈动脉体中的分布。应用组织化学技术检测CBS和CSE在颈动脉体中的表达分布并进一步用激光共聚焦对该酶在细胞中的分布进行定位研究。结果表明小鼠颈动脉体I型上皮细胞表达CBS和CSE免疫活性，主要分布在胞浆的近细胞膜部位。结论为颈动脉体中氧感受器细胞表达CBS和CSE，提示内源性H₂S可能影响颈动脉体化学感受器功能。
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  低氧诱导因子-1α小干扰质粒(siHIF-1α)抑制体内血管新生

  姜萌，王彬尧，王长谦，何奔，范华骅，邵琴，黄定九

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 150-155.

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  本研究拟通过腺病毒感染法观察低氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α， HIF-1α)的干扰质粒在体内对新生血管的抑制作用。构建干扰性siRNA质粒(siHIF-1α)， 在体外通过腺病毒介导的方法将人siHIF-1α质粒(Ad-siHIF-1α)转入人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells， EPC);观察EPC的感染效率;确定病毒滴度;并将此Ad-siHIF-1α EPC移植至缺血下肢模型，观察对新生血管的抑制作用。结果显示Ad-siHIF-1α感染效率约80%，移植异种Ad-siHIF-1α-EPC至Balb/c鼠缺血下肢后发现干扰后的EPC在体内显著抑制缺血部位的HIF-1α mRNA及蛋白 (P<0.05);Ad-siHIF-1α-EPC较对照组进一步抑制体内毛细血管数目(P<0.05);干扰组血流减慢，皮温降低(P<0.05)，缺血局部细胞扩增减少(P<0.05)。表明Ad-siHIF-1α干扰后的EPC在体内可抑制缺血下肢的局部血管新生。
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  抗血小板糖蛋白单克隆抗体的纯化及生物活性鉴定

  杨永昌，王北宁，赖春宁，黎燕

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 156-158.

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  原核表达重组质粒p3MH/P140κ-Fd，在E.coli XLI-Blue菌中获得了成功表达，利用重组蛋白中的6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析，对表达产物进行纯化。SDS-PAGE蛋白电泳和Western blot的检测结果证明，纯化得到的分子量约47kD蛋白是鼠源性的Fab抗体，ELISA检测结果证明，P140Fab抗体与人血小板能特异性结合。体外二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集抑制试验证明，P140Fab抗体对血小板的聚集有抑制作用，并且具有剂量抑制效应，IC₅₀的平均值为16.85mg/L。
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  雌性食蟹猴月经周期中雌二醇、孕酮水平的变化及其与血脂的关系

  马南花，黎宗强，郑丽萍，覃坚，朱旭，黄胜贤，谢莉萍

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 159-161.

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  观察雌性食蟹猴月经周期中雌二醇、孕酮水平的变化及其与血脂的相关性，并将其变化规律与育龄妇女月经周期中的雌二醇、孕酮变化规律相比较。选取20只性成熟雌性食蟹猴测定其血清雌二醇(E₂)、孕酮(P)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)和载脂蛋白B(ApoB)的水平，历时31～51天。观察其中6只在月经期、卵泡期、排卵期及黄体期的E₂、P、TC、TG、HDL-C、ApoA1和ApoB水平的变化。结果显示，雌性食蟹猴的E₂与TC、ApoA1、ApoB呈正相关，与TG、HDL-C呈负相关;P与TG、ApoB呈正相关，与HDL-C呈负相关。卵泡期E₂水平最高，黄体期P水平最高。雌性食蟹猴月经周期中E₂、P水平的变化与血脂水平的变化之间存在动态平衡。其E₂、P变化规律与育龄妇女月经周期中的变化规律相似，可能为探讨雌性激素与血脂变化的关系及其对心血管疾病的影响提供动物试验的基础资料。
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  诱导型一氧化氮合酶影响吲哚醌类化合物抗肿瘤活性的实验研究

  孔肇路，金一尊

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 162-166.

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  观察诱导型一氧化氮合酶(iducible nitric oxide synthase，iNOS)对新型吲哚醌类生物还原化合物630和630Ac的抗肿瘤活性和乏氧选择性的影响。以人纤维肉瘤细胞HT1080及其iNOS基因转染的细胞克隆为研究对象，噻唑蓝法检测不同iNOS活性的细胞克隆对化合物630和630Ac化学敏感性的差异;比较乏氧和有氧条件下半数抑制浓度(IC₅₀)的差异;流式细胞术观察化合物对细胞周期的影响。630Ac和630在实验中均显示出较强的抗肿瘤活性，且630Ac的细胞毒性强于630;而iNOS转染的细胞对630和630Ac敏感性较亲本细胞HT1080有所下降，IC₅₀分别高1~7倍左右。氧对630的细胞毒性无显著影响，而630Ac则具有较好的乏氧选择性细胞毒作用，尤其是对iNOS转基因细胞，有氧和乏氧条件下IC₅₀相差4~7倍。提示iNOS活性的增强会引起肿瘤细胞对化合物630和630Ac敏感性的降低。
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  ¹²⁵I粒子对食管癌Eca-109细胞凋亡及细胞周期的影响

  肖建，曹秀峰，龚涌灵，曹国宪，俞惠新，吴松年，张志勇，谭成，张莉，王玠

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 167-170.

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  研究¹²⁵I粒子诱导体外培养的人食管癌Eca-109细胞凋亡及对其细胞周期的影响。设置A组:对照(不加粒子)，B组:低剂量(7.4×10⁶Bq ¹²⁵I粒子1枚)，C组:中剂量(14.8×10⁶Bq ¹²⁵I粒子1枚)，D组:高剂量(29.6×10⁶Bq ¹²⁵I粒子1枚)，细胞培养1周后收集细胞，流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。4组凋亡细胞阳性指数(AI)分别为0.17%、1.17%、4.35%、4.72%，B、C和D组与A组之间均有非常显著性差异(P＜0.01);C组与B组，D组与B组比较，均有非常显著性差异(P<0.01)，D组与C组比较无显著性差异(P>0.05)。随粒子剂量增加，G₂/M期细胞所占比例增高，各组之间有非常显著性差异(P＜0.01)。¹²⁵I粒子可以诱导体外培养的人食管癌Eca-109细胞凋亡，其诱导凋亡的能力可能是通过把细胞阻滞在G₂/M期实现。
方法研究
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  血清白介素8固相放射免疫法的建立及应用

  王录焕，薛辉，林季，颜光涛

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 171-173.

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  本方法将兔抗人白介素8(IL-8)特异性抗体IgG包被塑料试管内壁，建立了一种快速、简便、高灵敏、特异的固相竞争放射免疫分析法(RIA)测定人血清中的IL-8。标准曲线范围为0.2~9.6ng/mL，最小检出值和正常值分别为0.16 ng/mL和0.30±0.05ng/mL。批内 CV%为6.8%，批间 CV% 为9.6%。本文所建的固相RIA法与液相RIA法平行测定58份样品的IL-8浓度(0.26~3.56 ng/mL)，经统计学处理，两者之间具有良好的直线相关(r=0.954，P<0.001，Y=0.994X)。表明本文建立的固相RIA法可以代替液相RIA法测定血清IL-8浓度，并适用于大批样品和自动化检测。
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  赭曲霉毒素A时间分辨荧光免疫分析法的建立及其考核

  黄飚，时瑾，朱岚，谢敏浩

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 174-177.

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  采用稀土离子标记技术，应用多克隆抗体建立高灵敏的赭曲霉毒素A(OTA)时间分辨荧光免疫分析法(OTA-TRFIA)。以OTA-KLH为免疫原制备抗OTA抗体;OTA与BSA的联结物(OTA-BSA)为固相抗原，与游离OTA共同竞争有限的兔抗OTA抗体;用Eu³⁺标记的羊抗兔抗体。该方法的灵敏度为0.02μg /L，测量范围为0.02μg /L~400μg /L，批内和批间CV分别为2.6%和5.2%，平均回收率为95.8%，与赭曲霉毒素B对OTA的检测有5.6%交叉反应，而黄曲霉毒素B₁及BSA则没有交叉反应。不同时间进行的OTA-TRFIA的ED80、ED50、ED20效应点值分别为0.2μg/L、1.0μg/L和 5.3μg/L。研究表明，OTA-TRFIA是目前OTA检测中最灵敏的方法之一，该分析方法稳定性好、可测范围宽，具有很好的应用前景。
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  慢性肝病患者血清甲状腺相关激素与β₂-微球蛋白水平相关性探讨

  吴在荣

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 178-179.

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  近年来，对非甲状腺疾病中的甲状腺功能状态的研究日益增多，有关肝硬化(LC)患者血清甲状腺激素水平的变化亦有报道。我们采用电化学发光免疫分析及免疫散射比浊法对147例慢性肝病患者(其中包括肝硬化患者45例)进行血清甲状腺激素水平测定及β₂-微球蛋白(β₂-MG)检测，以探索它们间的相关性，现将结果报道如下。
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  痉挛型脑瘫患者血清AKP、P和CRP水平及其临床意义

  陈惠，陈亮，贾淑芬，乌晴，乔虹，呼和塔纳

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 180-181.

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  脑性瘫痪是指脑在发育成熟前因受到损伤或发生病变而引起的、以非进展性中枢性运动障碍和姿势异常为主要表现的临床综合征，即随意运动受到损害，同时常伴有不同程度的智力障碍、癫痫以及视觉、听觉、进食、吞咽、言语、行为等多功能复合性障碍。小儿脑瘫严重影响到小儿的生长发育和今后的学习、就业，给家庭和社会带来难以承受的精神和经济负担。因此，积极防治、早期发现和正确治疗小儿脑瘫，对提高人口素质具有重要的意义。及时治疗还是有康复的希望的，越早越有利于患儿的成长发育。本文对221例痉挛性脑瘫患者血清碱性磷酸酶(AKP)、血清磷(P)和C-反应蛋白(CRP)作术前术后对照研究分析，痉挛性脑瘫患者可能存在持续性骨代谢紊乱和非炎性损伤，因此，对运动功能降低、制动、固定等影响脑瘫患者钙磷沉积不足的主要原因，应早期锻炼、减少固定和增大活动量可预防脑瘫患者骨质代谢异常并促进恢复。
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  阿片类物质依赖患者神经介质及细胞信使物质水平观察

  宋春丽

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 181-182.

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  百岁老人性激素水平的检测及其分析

  张阳，周颖，杨柳

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 183-184.

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  神经内分泌系统对机体发育和功能的维持至关重要。其中下丘脑-垂体-性腺与生长、衰老有密切相关^[1]。研究显示性激素水平不仅与骨形成、抑郁症、部分慢性疾病密切相关^[2，3]，因此，确定各年龄段健康老人人群的性激素水平对评估老年人个体的健康状况至关重要。
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  检测桥本氏甲状腺炎患者TPO抗体的临床意义

  张颖珍，潘学继，赵永成，韩佩珍

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 184-185.

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  甲状腺过氧化物酶(TPO)是一种与膜结合的血红素蛋白，是甲状腺激素合成的关键酶，也是引起自身免疫性甲状腺疾病(AITD)的一个重要的自身抗原。其与TPO抗体(TPOAb)的免疫反应，会引起AITD患者的临床症状的变化。桥本氏甲状腺炎(HT)是一种自身免疫性甲状腺疾病，表现为甲状腺肿型即HT伴有临床甲低症状。TPOAb的检测对诊断HT病具有重要的临床意义。
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  血清CA50和AFP检测的临床意义

  苗朋，孙长清

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 185-186.

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  为了观察分析肝癌、肝硬化患者与正常人群血清中CA50和AFP含量的差异，明确CA50、AFP对肝癌、肝硬化患者诊断的意义，随机采取本院就诊的54例肝癌、82例肝硬化患者和90名正常健康体检者血清，采用放射免疫法检测CA50和AFP含量的对比分析，现报告如下。
检测技巧
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  ELISA测定中影响因素简析

  李卫杨

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 186-187.

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  ELISA方法被广泛用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在临床检验中如果处理不当，会出现一些错误结果(即假阳性或假阴性结果)。引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②操作因素;③试剂因素。本文主要就标本因素和操作因素对ELISA测定的影响做如下讨论。
综述
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  瘦素与前列腺癌

  辶帝冬冬，林季，颜光涛

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 188-191.

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  前列腺癌是最为常见的一种男性泌尿系统肿瘤，多发生于50岁以上的男性。近几年来，由于我国男性居民生活方式、饮食习惯等方面的改变，该病的发病率呈上升的趋势。流行病学调查发现，前列腺癌与多种环境和遗传因素有关:年龄增加、体内雄激素含量增多、肥胖、大量饮酒或吸烟、家族遗传史等^[1]。
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  一例肾功能正常患者ECT肾动态显像误诊肾衰报告

  于杨洁，冯惠茹，刘洪涛，于芳，解小芬，陆相东

  标记免疫分析与临床. 2008, 15(3): 192-193.

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  患者，男，41岁，皮肤紫癜半年伴头晕入院。体格检查:体温36.5℃，脉搏88次/分，Bp120/90mmHg，呼吸18次/分，发育正常，营养良好，双下肢皮肤散在点片状陈旧性紫癜，其余皮肤未见明显异常，淋巴结正常，心肺听诊正常，全身无明显浮肿，血生化检查示肝、肾功能正常，电解质、血沉、抗链“O”、类风湿因子、生化八项、血脂检查均正常，血、尿常规正常。肌酐清除率(CCr)96mL/min，心脏、泌尿系统超声正常，肝胆脾胰超声示脂肪肝，心电图正常，X线胸片示颈椎轻度骨质增生。初步诊断:①过敏性皮肤紫癜;②脂肪肝。为进一步了解双肾功能，行^99mTc-DTPA肾动态显像。